結(jié)合此前關(guān)于大鼠肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)、表型維持的相關(guān)背景，大鼠Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞（AEC-Ⅰ）本身體外極難長期存活，幾乎無法穩(wěn)定傳代，僅能通過以下特殊操作實(shí)現(xiàn)有限傳代：
?前置準(zhǔn)備?
選用體外培養(yǎng)3天內(nèi)、表型穩(wěn)定的AEC-Ⅰ，使用含2%低血清+10ng/mL EGF的DMEM/F12培養(yǎng)基，提前預(yù)熱所有試劑至37℃。
?消化操作?
棄去舊培養(yǎng)基，用無鈣鎂PBS輕洗細(xì)胞2次，加入0.05%低濃度胰酶，37℃消化1分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞剛變圓就立即用培養(yǎng)基終止消化。
?接種培養(yǎng)?
1000RPM離心5分鐘收集細(xì)胞，以不低于2×10?個(gè)/cm2的高密度接種，置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。
?關(guān)鍵注意事項(xiàng)?
該細(xì)胞傳代后僅能維持3-5天的AEC-Ⅰ表型，無法進(jìn)行二次傳代，需在傳代后盡快完成實(shí)驗(yàn)，避免細(xì)胞發(fā)生去分化或凋亡。
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