ACP是一種在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解的酶。該酶主要用于酒精發(fā)酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。
測定原理：
酸性條件下，ACP催化酪蛋白水解產(chǎn)生；在堿性條件下，還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)；鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰，通過測定其吸光度增加，來計算ACP活性。
自備儀器和樣品：
水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、0.5mL EP管和蒸餾水。
粗酶液提取：
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。
3、血清等液體：直接測定。
樣本采集與保存注意事項：
動物肝臟等ADH富集樣本需冰上快速采集，采集后立即液氮速凍，-80℃避光保存。
植物樣本需液氮研磨后分裝凍存，全程避免反復(fù)凍融，防止酶活性降解。
樣本處理操作注意事項：
組織研磨全程在冰浴中進(jìn)行，使用預(yù)冷研缽，間歇操作避免產(chǎn)熱導(dǎo)致酶失活。
細(xì)胞裂解采用溫和方式，超聲波破碎需控制功率和時間，裂解液中添加蛋白酶抑制劑。
酶液需通過預(yù)實(shí)驗(yàn)系列稀釋，確保反應(yīng)在3-5分鐘內(nèi)保持線性區(qū)間。
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